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微流控Drop-seq單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)
技術(shù)文章 2023-05-16

  高通量液滴微流控Drop-seq單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)是一種可快速分析數(shù)千個(gè)單細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法,通過(guò)對(duì)細(xì)胞包裹在微滴中的操作,可進(jìn)行RNA雜交,且生成mRNA轉(zhuǎn)錄物,對(duì)其制作細(xì)胞基因表達(dá)譜,可進(jìn)一步分析mRNA轉(zhuǎn)錄物的起源細(xì)胞。


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  微流控Drop-seq也是一種單細(xì)胞RNA測(cè)序技術(shù),通過(guò)在微滴中去捕獲單細(xì)胞并擴(kuò)增RNA來(lái)獲取生物細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。生物細(xì)胞可通過(guò)微滴分離可分解細(xì)胞,在微滴中加入反轉(zhuǎn)錄酶和barcodebeads珠,且這類珠子可以被反轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄為RNA,可在RNA末端加入一個(gè)序列,從而標(biāo)記每一個(gè)RNA分子及其細(xì)胞來(lái)源;通過(guò)PCR擴(kuò)增這些標(biāo)記的RNA分子,可將其構(gòu)建成一個(gè)文庫(kù),可對(duì)其進(jìn)行高通量測(cè)序,從而可獲得單細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。

  

  通過(guò)微流控技術(shù),可將捕獲RNA的微珠和單細(xì)胞同時(shí)包裹在液滴中,然后在液滴中可完成細(xì)胞MRNA的富集,然后合并微珠,可完成生物細(xì)胞的建庫(kù)并測(cè)序;基于微流控液滴的單細(xì)胞測(cè)序可在短時(shí)間內(nèi)同時(shí)批量處理更多生物細(xì)胞,但由于微珠捕獲MRNA的限制,該方法可在獲得細(xì)胞數(shù)量的同時(shí)測(cè)到減少的基因數(shù)。


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  Drop-seq技術(shù)與其他的細(xì)胞測(cè)序技術(shù)相比,它可以在細(xì)胞數(shù)量有限的狀態(tài)下實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞RNA測(cè)序,且具有高通量、高靈敏度和高特異性等性能應(yīng)用特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究;微流控Drop-seq單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)在神經(jīng)科學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、腫瘤學(xué)等多個(gè)行業(yè)研究領(lǐng)域也得到了廣泛的應(yīng)用。


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